人ELISA試劑盒用此法判斷結(jié)果要求實(shí)驗(yàn)條件十分恒定，試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化，陽性和陰性的對照品應(yīng)符合一定的規(guī)格，須配用精密的儀器，并嚴(yán)格按規(guī)定操作。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)檢測而得到的。現(xiàn)舉某種檢測 HBsAg 的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg 的復(fù)鈣人血漿，陽性對照品HBsAg 的含量標(biāo)明為P=9±2ng /ml。每次試驗(yàn)設(shè)2 個(gè)陽性對照和3 個(gè)陰性對照。
    測得A 值后，先計(jì)算陰性對照A 值的平均數(shù)（NC X ）和陽性對照A 值的平均數(shù)（PCX），兩個(gè)平均數(shù)的差（P-N）必須大于一個(gè)特定的數(shù)值（例0.400），試驗(yàn)才有效。3 個(gè)陰性對照A 值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤.5 ×NCX，如其中之一超出此范圍，ELISA試劑盒則棄去，而已另兩個(gè)陰性對照重新計(jì)算NCX；如有兩個(gè)陰性對照A 值超出以上范圍，則該次實(shí)驗(yàn)無效。

      標(biāo)本 A 值＞陽性判定值的為陽性，小于陽性判定值的為陰性。應(yīng)注意的是，式中0.05 為該試劑盒的常數(shù)，只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。根據(jù)以上敘述可以看出，在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗(yàn)的質(zhì)控作用，試劑變質(zhì)和操作不當(dāng)均會產(chǎn)生"試驗(yàn)無效"的后果。

      b.標(biāo)本/陰性對照比值在競爭法ELISA試劑盒中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對照的吸光度在.0-.5 之間，此時(shí)反應(yīng)zui為敏感。競爭法 ELISA 不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽性反應(yīng)與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計(jì)測定，讀出S、P 和N 的吸光值。計(jì)算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。