大鼠ELISA試劑盒每次試驗(yàn)均應(yīng)同時(shí)使用陰性對(duì)照血清，可選擇強(qiáng)陽(yáng)性的血清作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照血清，并可自己設(shè)定其為00單位（免疫酶單位-EIU）。這樣每次試驗(yàn)均參考陽(yáng)性血清結(jié)果確定每份血清的相對(duì)抗體水平，其計(jì)算公式如下：標(biāo)本值-陰性對(duì)照值  陽(yáng)性對(duì)照值-陰性對(duì)照值有此測(cè)定（如間接法ELISA試劑盒）需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器，在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。

       如果國(guó)內(nèi)或上的標(biāo)準(zhǔn)抗體和檢測(cè)方法，那么所用的參考血清應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)血清對(duì)照實(shí)驗(yàn)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，但如果所用的檢測(cè)方法不同，標(biāo)準(zhǔn)化時(shí)就存在差別，不同的方法ELISA試劑盒檢測(cè)出的結(jié)果不能反映出參考血清和標(biāo)準(zhǔn)血清之間的差別。無(wú)特異抗體的血清稀釋陽(yáng)性血清繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，選擇的稀釋度應(yīng)很容易區(qū)別陽(yáng)性。

      抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過(guò)程稱(chēng)為溫育(incubation)，有人稱(chēng)之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng)。