檢測ELISA試劑盒對牛乳中

  初步組裝試劑盒并對試劑盒的各組分的穩(wěn)定性進行了檢測和優(yōu)化，成功建立了能在6個月內(nèi)維持穩(wěn)定的ELISA試劑盒，并以所組建的試劑盒對牛奶樣品中的添加藥物進行了測定。利用5C0雜交瘤細胞株的小鼠腹水單抗建立了檢測SM殘留的間接競爭ELISA方法。采用包被抗原稀釋度∶3200，腹水抗體的工作濃度∶.6×05，尺度曲線線性方程為y=.0522-0.3276x(0～000ng/ml)，半數(shù)按捺濃度為93.22ng/ml，檢測限約為5ng/ml。氨基糖苷類抗生素是一類應用廣泛的廣譜抗菌藥物，主要包括(SM)、(GM)、(KM)等，對奶牛乳房炎、等有很好的療效，常用作獸醫(yī)臨床治療及飼料藥物添加劑。對患乳房炎奶牛進行肌肉打針和乳房給藥治療，采用本試劑盒測定牛奶中的殘留濃度，證明用藥后牛奶的廢棄期分別為至少2d和4.5d。分別采用CMO法、活化酯法、戊二醛法合成了的5種人工抗原，從免疫原性及不亂性等方面臨5種抗原進行比較，*選擇活化酯法合成的BSA-SM/b作為免疫抗原，通過雜交瘤技術(shù)獲得株能不亂分泌抗特異性單克隆抗體的雜交瘤細胞株5C0。通過實驗比較了5種樣品處理方法，選擇用Careez法處理并4倍稀釋后用于測定。為探索一種能夠快速有效的檢測牛奶中殘留的方法，本研究采用單克隆抗體技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附測定等技術(shù)，合成人工抗原，制備出抗單克隆抗體，建立了檢測牛奶中SM殘留的ELISA測定法，組建成快速檢測ELISA試劑盒并進行了優(yōu)化和實際應用。